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微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案

发表时间:2021-07-30 09:29

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)
验证方案
微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案
编码:表
一、验证方案的起草与批准
1.验证方案起草
起草人: 起草时期: 年 月 日
2.验证小组成员:
3.验证方案审核
4.验证方案批准
批准人: 批准日期:
二、验证方案
1.验证目的和原理
1.1验证目的
为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定,特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行,若因特殊原因确需要变更时,应报验证委员会批准。
1.2原理
通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤
2.1验证前的准备:进行微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证前,所有的平皿和稀释剂都应该严格
按照相关的灭菌程序消毒,以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
2.2验证试验的操作计划:用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验,通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。
2.3试验结果可接受标准:用标准菌株评价方法“ ”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性,试验结果应显示3次独立的平行试验中,稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%,试验组回收率也不低于70%。
3.试验实施
3.1试验前的准备
3.1.1主要仪器设备:恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境:操作间应该安装空气除菌过滤层装置。环境洁净度不应低于10000级,局部洁净度为100级(或放置同等级净化工作台)。操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压,不低于4.9pa。
3.1.3试验样品:
批号: 批号: 批号:
3.1.4培养基:
3.1.5稀释液:PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号
实验菌株的来源:
编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
3.1.7器具:无菌薄膜过滤器:(孔径0.45um直径50mm)、无菌移液管(5ml)
4.验证方法
4.1菌液的制备
将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30~35℃下培养18~24小时,将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中,在23~28℃下培养24~48小时。将黑曲霉接种至改良马丁液体培养基中,在23~28℃下培养5~7天。将上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数为50~100cfu的菌悬液。
4.2实验方法
供试液的制备:取样品10g(ml)加入无菌PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇使分散均匀□,用匀浆仪混匀□,置45℃水浴使胶囊壳溶化混匀□,制成1:10均匀的供试液。
A样品试验组
取1:10供试液(相当1g或1ml供试品)10ml,加至100ml稀释液中混匀,过滤并用稀释液冲洗滤膜3次,每次100ml,在*后一次冲洗液中加入50~100cfu菌液,滤完后,将接有细菌的滤膜取出,菌面向上(接触细菌和样品的面)贴于已凝固的培养基上。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌贴于营养琼脂培养基平皿上;白色念珠菌、黑曲霉贴于玫瑰红钠琼脂培养基平皿上。
B菌液组
取上述制备菌液各1ml加至100ml稀释液中混匀,过滤并用稀释液冲洗滤膜3次,每次100ml,滤完后,将接有细菌的滤膜取出,菌面向上(接触细菌和样品的面)贴于已凝固的培养基上。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌贴于营养琼脂培养基平皿上;白色念珠菌、黑曲霉贴于玫瑰红钠琼脂培养基平皿上。
C供试品对照组
取上述1:10供试液10ml,加至100ml稀释液中混匀,过滤并用稀释液冲洗滤膜3次,每次100ml,滤完后,将滤膜取出,接触样品的面向上贴于已凝固的培养基上。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌贴于营养琼脂培养基平皿上;白色念珠菌、黑曲霉贴于玫瑰红钠琼脂培养基平皿上。
D稀释剂对照组
取PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次,每次100ml,在*后一次冲洗液中加入50~100cfu菌液,滤完后,将接有细菌的滤膜取出,菌面向上贴于已凝固的培养基上。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌贴于营养琼脂培养基平皿上;白色念珠菌、黑曲霉贴于玫瑰红钠琼脂培养基平皿上。
4.3培养
将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30~35℃下培养48小时,将白色念珠菌、黑曲霉在23~28℃下培养72小时,点计菌落数。
5.试验结果
5.1产品试验组微生物生长检查情况: 批号:
5.2供试品对照组微生物生长检查情况: 批号:
5.3稀释剂对照组微生物生长检查情况: 批号:
5.4菌液组微生物生长检查情况: 批号:
6.回收率计算
6.1稀释剂对照组菌回收率
表中:回收率=稀释剂对照组的平均菌落数÷菌液组的平均菌落数×100%。
6.2试验组菌回收率
表中:回收率=(试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数)÷菌液组的平均菌落数×100%。
7.结论:
7.1经过验证,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率分别为 %、 %、 %、 %、 %。
7.2稀释剂回收率为 %、 %、 %、 %、 %。
以上验证结果证明,本品 采用上述方法进行微生物限度检查。
检验人: 复核人:
8.验证结果评价分析
质控部负责各项验证、试验结果记录,验证小组根据验证、试验结果进行评价,起草验证报告,报验证委员会。
验证委员会负责对验证结果进行综合评审,做出验证结论,发放验证证书。对验证结果的评审应包括:
(1) 验证试验是否有遗漏;
(2) 验证实施过程中对验证方案有无修改,修改原因、依据以及是否经过批准;
(3) 验证记录是否完整;
(4) 验证试验结果是否符合标准要求,偏差及对偏差的说明是否合理,是否需进一步补充试验。
9.*终审批
验证报告由验证组长审核后,报验证总负责人批准,并签发验证证书。
验证报告
年 月 日至 年 月 日,验证小组根据批准的微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证文件对微生物限度检查法进行了相关的一系列验证工作,达到了预期效果,滋将有关事项说明如下:
1、 验证方案在实施过程中未做修改。
2、 验证方案各项性能指标在验证中未作变动,误差在允许范围内。
3、 验证过程中结果符合规定要求,记录完整属实。
4、 验证结果符合设计要求和GMP原则要求,可以投入使用。
5、 组分或检验条件改变时须重新验证。

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